rhill45

Оптимизация трансфекции с помощью катионного липида для 150-миллиметровых блюд


Культура клеток Трансфекция Биология

Мне нужно оптимизировать протокол трансфекции, чтобы временно выразить плазмиду, кодирующую химеру eyfp, присоединенную к c-члену сигнальной молекулы аппарата Гольджи) в клетках гели и клетках hepg2 и получить такое же высокое выражение, какое я могу получить.

Мне нужно достаточное количество белка около 100 wb. Я засеял клетки гели до 12 150-миллиметровых блюд. И то же самое с hepg2. Я приготовил мг плазмиды.

Я использую invitrogens оригинальный липофектаминовый реагент; а не 2000, или ltx или любой из этих вещей.

Любые предложения по протоколу здесь для гела и hepg2 плазмиды dna и опосредованной липофектамином трансфекции на таком большом размере пластины.

Я полагаю, что только масштабирование должно работать, но здесь есть некоторые подводные камни. Посмотрите на эту таблицу, например, когда вы переходите от 60 до 100 мм, вы удваиваете площадь, так что вы также можете удвоить объем культуры. Однако, когда вы идете от 100 до 150 мм, вы утроиваете площадь, но только увеличиваете объем культуры в два раза. Это приводит к тому, что мои вычисления масштабирования для трансфекции выглядят действительно:

объемы и площади культуры

CKM
Несмотря на то, как выглядят цифры, по всем значениям, идущим от 100 мм до 150 мм, вы увеличиваете коэффициент в 2.76: (a) 152/55 = 2.76, (b) 1.52e7 / 5.5e6 = 2.76, (c) | ср (30.4-45.6) / ср (11-16.5) | = 2,76.

rhill45
Ааа! Я должен был смять цифры, чтобы вы правильно исправились. Это странная концепция, потому что, когда вы увеличиваете объем судна, вы хотите, чтобы все параметры, в идеале, я бы подумал, увеличились с одинаковой скоростью. Однако глубина СМИ может достигать определенного момента, когда я считаю, что это мешает росту. Когда объем становится слишком большим, он может занять слишком много времени для тех необходимых растворимых факторов, которые могут возникнуть в окружающей среде. Также увеличение средней глубины может задержать доставку растворимого кислорода в клетки. Спасибо, что просмотрели

rhill45
Вся моя глупость, чтобы сделать этот комментарий. Я думаю это ? Я немного разбросаю, я собираюсь изменить его, чтобы сфокусировать его на соотношении, области и объеме, если вы хотите опубликовать свой ответ. Я отправлю отдельно? На оптимизацию hela

cagliari2005
@Kendall, пожалуйста, напишите свой комментарий как ответ, чтобы закрыть этот вопрос. Благодаря!

Ответы


CKM

Таким образом, для каждой строки протокола тарелки весь процесс масштабируется с дискретным значением. В случае от 100 мм до 150 мм значения масштабируются примерно на 2,76 по всем значениям:

(a) 152/55 = 2,76, (b) 1,52e7 / 5,56-6 = 2,76, (c) | avg (30,4-45,6) / avg (11-16,5) | = 2,76

(как указано в комментариях)

Смотри также