Какова причина выбора репортерного гена при экспериментировании с интересующим вас геном?

Кира

Какова причина выбора репортерного гена при экспериментировании с интересующим вас геном?

В примерах экспериментов в классе я заметил, что разные репортерные гены выбираются для вставки рядом с интересующим вас геном, чтобы проверить, экспрессируется ли этот ген. Например, вы можете вставить ген флуоресценции рядом с интересующим вас геном, чтобы знать, транскрибируется он или нет, по тому, являются ли клетки организма флуоресцентными и в какой степени они флуоресцируют.

В некоторых экспериментах, которые имеют несколько версий, я заметил, что в одном случае они используют флуоресцентный ген, а в другом — другой ген (например, лактозу). Обе части эксперимента используют почти одинаковые шаги, так почему бы им не выбрать один и тот же репортерный ген?

Джанпаоло Р.

Уже хорошие ответы здесь. Кстати, я веду блог о репортерских генах , если вам интересно.

Алеадам

Разные гены будут служить разным целям. Например, если вы хотите провести исследования колокализации, то флуоресцентные гены, такие как eGFP и DS-Red (или любые их вариации, а именно Emerald, mCherry и т. д.), будут весьма полезны, поскольку вы можете использовать различные фильтры на своем микроскопе для различные флуорофоры. Для морфологических оценок, возможно, лучше подходят ген LacZ или щелочная фосфатаза, поскольку обнаружение этих ферментов совместимо со стандартными гистологическими методами, и обычно вы получаете гораздо лучший контраст, чем при флуоресценции. Для целей количественного определения вы, вероятно, использовали бы люциферазу светлячка или CAT, поскольку для этих ферментов существуют очень хорошие количественные анализы.

Решение также будет зависеть от степени опыта лаборатории с каждым методом обнаружения и даже от наличия конструкций. Если репортер уже создан в соседней лаборатории и если он соответствует вашим потребностям, вы просто используете его, а не создаете свой собственный, даже если репортерный ген не был бы вашим первым выбором.

пользователь560

Гены-репортеры также используются, когда эксперимент пытается отличить эффект того гена, который вводит ученый (экзогенный), и того же гена, который уже есть в клетке (эндогенный). В идеале хотелось бы выбрать клеточную систему, не содержащую интересующие эндогенные гены из-за этого мешающего эффекта, но это не всегда возможно.

Репортерные гены также в основном используются, когда невозможно или очень сложно непосредственно измерить представляющий интерес ген, особенно если ген относительно малоизвестен в научной литературе. Например, клетки, которые не экспрессируют ген тимидинкиназы, невозможно визуализировать с помощью позитронно-эмиссионной томографии. Это не потому, что с интересующим геном что-то не так, просто клеткам нужен способ удерживать радиоактивный агент, который может быть обнаружен с помощью ПЭТ-аппарата. Точно так же очень часто используются флуоресцентные гены, потому что часто необходимо увидеть, где продукт гена находится внутри клетки, и единственный способ сделать это — совместить его с чем-то видимым под микроскопом, что позволяет увидеть флуоресценцию и клеточную структуру. структуры. Наконец,

крушна

Гены-репортеры стали бесценным инструментом в исследованиях экспрессии генов. Ген состоит из двух функциональных частей: одна представляет собой последовательность ДНК, которая дает информацию о продуцируемом белке (кодирующая область). Другая часть представляет собой специфическую последовательность ДНК, связанную с кодирующей областью; он регулирует транскрипцию гена (промотор). Промотор либо активирует, либо подавляет экспрессию гена. Целью анализа репортерного гена является измерение регуляторного потенциала неизвестной последовательности ДНК. Так что это весьма полезно, это своего рода обратное проектирование функции, а затем сообщить, что именно она делает.

А. Кеннард

Этот ответ касается того, что такое репортерный ген, но похоже, что ОП уже знает это. ОП на самом деле спрашивает, почему вы должны использовать конкретный репортерный ген в конкретном контексте. Если у вас есть дополнительные сведения об этом вопросе, которые еще не были включены в два сообщения выше, пожалуйста, измените свой ответ.