Как я могу определить, находится ли регуляция на транскрипционном или трансляционном уровне?

Я читал статью http://www.pnas.org/content/109/8/E471.short , где авторы утверждают, что (e475)

Трансляция TfR (рецептора трансферрина) регулируется с помощью последовательностей в 3'- и 5'-UTR (нетранслируемых областях) его мРНК. Чтобы изучить регуляцию уровней TfR независимо от контроля трансляции, мы измерили уровни TfR-EGFP, экспрессированные из плазмиды, в которой отсутствуют регуляторные последовательности, присутствующие в эндогенной мРНК TfR (рис. 6А). Уровни эндогенного и меченного GFP экспрессированного TfR снижались в равной степени в ответ на истощение Rabenosyn-5, что исключает влияние этого белка на транскрипционный или трансляционный контроль экспрессии TfR .

Кажется, я понимаю, что эффект не может быть посттрансляционным, поскольку TfR-GFP не имеет области для трансляционной регуляции и поэтому не может регулироваться каким-либо трансляционно активным регулирующим фактором.

Мой вопрос таков: разве приведенное выше утверждение о том, что рабенозин-5 не влияет на транскрипцию белка, не требует доказательства того, что этот белок не влияет на уровни мРНК?

http://www.pnas.org/content/109/8/E471.figures-only

Рис. 6А, http://www.pnas.org/content/109/8/E471.figures-only

Ответы (1)

Из раздела «Методы»:

Человеческий TfR в плазмидной кДНК был подарен Тимом МакГроу (Медицинский колледж Вейл-Корнелл, Нью-Йорк, штат Нью-Йорк). кДНК TfR человека субклонировали в рамке считывания с EGFP в векторе Clontech pEGFP-N1 по сайтам рестрикции XhoI и BamHI.

Этот слитый белок TfR-GFP не имеет эндогенного промотора TfR. Таким образом, вряд ли он будет регулироваться каким-либо TF, который непосредственно регулирует транскрипцию TfR.

Таким образом, они пришли к выводу, что Rabenosyn-5 специфически не регулирует экспрессию TfR.

Я понимаю. Думаю, если бы плазмида кДНК имела какую-либо регуляторную последовательность, они бы это указали.
кДНК может иметь 5'- и 3'-UTR, но здесь это не так.
Как я могу определить, находится ли регуляция на транскрипционном или трансляционном уровне?
СпросиСетьПолитика конфиденциальности1y, 0v