В исследовании исследуются три белка A, B и C одинаковой молекулярной массы. Они содержат шесть, четыре и четыре цистеиновых остатка соответственно. Только белки А и В обрабатывали β-меркаптоэтанолом (который восстанавливает дисульфидную связь) и нагревали на кипящей водяной бане в течение нескольких минут. Что из перечисленного ниже ожидается при анализе геля SDS PAGE?
а. Белок С будет двигаться быстрее всего.
б. Белок B будет двигаться быстрее.
в. Белки А и В будут двигаться с одинаковой скоростью, но быстрее, чем С.
д. Белки В и С будут двигаться с одинаковой скоростью.
Прежде чем узнать ответ, я думал, что ответ будет b. Потому как протеина А больше всего нет. аминокислот, поэтому он точно будет позади протеинов B и C. А для белков B и C, поскольку белок B находился в восстанавливающей среде, он не будет образовывать дисульфидные мостики, а белок C будет, поэтому он будет биллорным и, следовательно, будет отставать от белка B. Значит, B будет самым быстрым?
Но ключ ответа говорит C, я не совсем уверен, как это сделать?
Итак, ответ С. Прежде чем узнать ответ, я думал, что ответ будет b. Потому как протеина А больше всего нет. аминокислот, поэтому он точно будет позади протеинов B и C. А для белков b и c, поскольку белок B находился в восстанавливающей среде, он не будет образовывать дисульфидные мостики, но белок C будет, поэтому он будет биллорным и, следовательно, будет отставать от белка B. Значит, B будет самым быстрым? Но ключ ответа говорит C
В постановке задачи сказано, что все белки имеют одинаковую молекулярную массу, но не указано , сколько в них аминокислот. Это говорит о том, сколько цистеиновых аминокислот содержится в каждом, но не о том, сколько других видов они имеют. Цистеин образует дисульфидные связи, удерживая изгибы в структуре белка .
SDS представляет собой детергент, присутствующий в буфере образца SDS-PAGE, где, наряду с небольшим кипячением и восстанавливающим агентом (обычно DTT или B-ME для разрушения дисульфидных связей белок-белок), он разрушает третичную структуру белки. Это сводит свернутые белки к линейным молекулам. SDS также покрывает белок однородным отрицательным зарядом, который маскирует внутренние заряды R-групп.
Таким образом, смысл SDS-PAGE состоит в том, чтобы белки мигрировали в геле в соответствии с молекулярной массой без учета естественных зарядов, переносимых различными компонентами аминокислот. Таким образом, три белка должны мигрировать с одинаковой скоростью в SDS-PAGE (не A медленнее, чем B и C, как думал OP).
Однако белок C не обрабатывается β-меркаптоэтанолом (B-ME), который является важной частью SDS-PAGE, поэтому он сохраняет дисульфидные поперечные связи и, таким образом, не представляет собой линейную цепочку аминокислот. Следовательно, C будет мигрировать медленнее, чем A и B, и ожидаемый результат будет таким, как указано в выборе (c).
Николай
Равлин Каур
Николай