Ферменты рестрикции, как определяются последовательности узнавания?

В этой статье описан простой метод определения сайтов рестрикции, который был использован для определения рестрикционной последовательности ранее не охарактеризованного фермента из Haemophilus gallinarum .

Короче говоря, известная последовательность ДНК (от фага$\phi \text{X174}$) частично расщепляется рестрикционным ферментом, и различные расщепленные фрагменты можно использовать для определения относительных расстояний между каждым из сайтов рестрикции.

Затем рестрикционные фрагменты удлиняют с помощью полимеразы Т4 и секвенируют с помощью$^{32}\text{P}$помечено как секвенирование по Сэнгеру .

Как только рестрикционная карта фермента на известной последовательности ДНК завершена, отдельные фрагменты можно проверить на сходство. Например, Hga I имеет сайт узнавания за пределами сайта рестрикции. Поэтому при сравнении отдельных сайтов рестрикции видно, что все они имеют сайт узнавания GACGC.