Ферменты и плазмиды

Класс средней школы проанализировал плазмиды с помощью ферментов рестрикции и электрофореза.

Класс получил две разные плазмиды, pBR 322 и pC 508. Эти две плазмиды должны были быть вырезаны EcoR I и Hind III.

На рис. 1 показаны две плазмиды с указанием двух точек разреза для EcoR I и Hind III.

Кроме того, точки разреза также показаны для фермента Pst I.

На рисунке 2 вы можете увидеть результат рестрикционного анализа.введите описание изображения здесь

Вопросы:

1) Проанализируйте и объясните результаты на рисунке 2.

2) Какие фрагменты ДНК образовались бы при клипировании Pst I?

1) Вы можете видеть, что на рисунке показан результат рестрикционного анализа. Что касается плазмиды pBR 322, то вы видите, что в результате разрезания Hind III и EcoRI I оба фермента имеют одинаковый размер. На рисунке 1 показано, что Hind III режет более 0 оснований, а EcoR I режет 0 оснований.

В pC508 вы видите, что оба фермента сократились вдвое. EcoR Я разрезал на 1200 и 5800 оснований, что вы можете видеть на рисунке 1. Результат этого вы можете увидеть на рисунке 2 (гель-электрофорез). Hind III разрезается на 6400 и 1200 оснований, что опять-таки объясняет, почему молекулы ДНК (рисунок 2) имеют разный размер.

2) Если бы Pst I использовался вместо этого на плазмиде pBR 322, вы бы получили тот же размер, что и Eco и Hind, потому что все они разрезают одно место. Если бы вы вырезали pC508, вы бы получили базы 4800 и 6700 (как показано на рисунке 1).

Правильно ли даны ответы на эти вопросы?

Ответы (1)

Ваша оценка размеров фрагментов для pC508 неверна.

Посмотрите на размер плазмиды в центре круга. Сумма ваших фрагментов должна равняться этому числу. Таким образом, если вы были уверены, что размер одного фрагмента составляет 1000 п.н., то размер другого фрагмента должен быть 6300 п.н.

Вы также должны заметить, что размеры фрагментов для дайджестов EcoR1 и HindIII не должны совпадать.

Вам также нужно сказать что-то о типе ДНК, который у вас есть в дорожках pBR322. Является ли он линейным, круговым, сверхспиральным?

Что касается вопроса 2, ваше объяснение pBR322 в порядке, вы все равно должны указать тип ДНК, который у вас есть в этих дорожках.

Вам нужно объяснить не только место разреза PSTI, но и размер фрагментов, которые он производит.

Место, где происходит разрезание рестрикционным ферментом, называется сайтом рестрикции, поэтому вместо того, чтобы говорить «разрезы в одном месте» или «два места», следует говорить «в одном месте рестрикции» и т. д.

Спасибо, но что вы подразумеваете под: «Вы также должны заметить, что размеры фрагментов для расщеплений EcoR1 и HindIII не должны быть одинаковыми». Вам также нужно сказать что-то о типе ДНК, который у вас есть в дорожках pBR322. Является ли он линейным, круговым, сверхспиральным?» Что касается 2) он явно круговой? Но, может быть, я не понимаю, что вы имеете в виду?
Сделайте математику, чтобы выяснить длину каждого фрагмента. Также внимательно изучите свой гель для расщепления pC508. Являются ли эти фрагменты одинаковым количеством пар оснований? Что касается «2)», правда? Что вы сделали с плазмидой pBR322 перед загрузкой ее в гель, и что это сделало с ДНК?
Ферменты и плазмиды
СпросиСетьПолитика конфиденциальности1y, 0v