Из 10 стадий гликолиза только одна реакция — глицеральдегид-3-фосфат (G3P) в 1,3-бисфосфоглицерат (PGP) — использует NAD+ и, таким образом, производит NADH. Кроме того, именно этот этап отвечает исключительно за чистый прирост 2АТФ в гликолизе, поскольку здесь фосфорилирование происходит без расхода АТФ.
Почему NAD+ используется только на этом этапе? Можно ли по другой информации предсказать, что это единственный шаг, требующий NAD+? Можно ли осуществить эту реакцию без участия НАД(Ф)+? Можно ли пропустить этот шаг и напрямую производить 3-фосфоглицерат (давайте не будем волноваться, даже если мы не можем производить АТФ в этом процессе). Я заинтересован в этом, потому что этот шаг требует ферментации для регенерации NAD+ в анаэробных условиях. E. coli продуцировала ацетат в качестве побочного эффекта, как и ожидалось в анаэробных условиях, но также довольно неожиданно во время аэробных условий и условий с высокой скоростью роста (ацетат-переключатель, проблема переполнения). Производство ацетата нежелательно во многих промышленных применениях.
NAD+ важен на этом этапе, так как он является кофактором для глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (G3PDH), которая действует как акцептор атома водорода от C1 (см. ниже).
Если вы посмотрите на реакцию, альдегид из C1 окисляется до карбоновой кислоты, которая на втором этапе превращается в фосфоэфир. Для этого цистеин из активного центра G3PDH атакует G3P и образует полуацеталь. Он окисляется до сложного тиоэфира, гидрид, который отщепляется на этой стадии, переносится на NAD+, связанный G3PDH. На втором этапе тиоэфир, образующийся между ферментом и G3P, подвергается атаке молекулой неорганического фосфата с образованием 1,3-BPG. Этот шаг возможен только за счет расщепления очень богатой энергией тиоэфирной связи. Таким образом, чтобы эта реакция произошла, вам нужны обе стадии, так как в противном случае образование богатой энергией связи фосфатного эфира не произошло бы. Подробнее см. здесь .
Чтобы перейти непосредственно от G3P к 3-PG, вам понадобится фермент, который окисляет альдегидную группу в G3P. И тогда снова нужен акцептор для отщепленного здесь водорода.