Связывает ли GTP-γS (GTP gamma S) все GTP-связывающие белки?

Я только что прочитал статью Rab10 GTPase регулирует динамику и морфологию ER — Nature Cell Biology 15, 169–178 (2013) doi: 10.1038/ncb2647 . В этой статье, чтобы идентифицировать Rab-белки в ER, сначала изолировали везикулы ER. Затем их промывали для удаления цитозольных белков. После промывания эти везикулы солюбилизировали детергентом. Затем его загружали в колонку с GTP-агарозой (для связывания GTP-связывающих белков с колонкой). На последней стадии GTP-связывающие белки элюировали GTP и анализировали с помощью SDS-PAGE.

В качестве контроля (перед загрузкой в ​​колонку) они использовали GTP гамма-S, поскольку он предотвращает связывание GTP-связывающих белков с колонкой. Когда я посмотрел на их фигуру; на контрольной полосе много полос! Так что я в замешательстве: (Если это предотвращает связывание GTP-связывающих белков с колонкой, после элюирования из колонки с агарозой GTP, почему появляются полосы? И что это могут быть за полосы?)

Если вы можете добавить ссылку на статью (надеюсь, она в открытом доступе), это будет полезно для интерпретации результатов.
Название этой статьи: «ГТФаза Rab10 регулирует динамику и морфологию ЭР». Ссылка: nature.com/ncb/journal/v15/n2/full/ncb2647.html .
Но я все еще вижу цифры. О каком из них у вас был вопрос?
Вроде как связано: biology.stackexchange.com/questions/3258/…
Я прочитал ответ на вопрос по этой ссылке. Но я не мог понять точно. Итак, GTP-gamma S очень сильно связывается только с GTPases? Это причина?

Ответы (1)

Это фигура, о которой вопрос. Справа контрольный опыт с GTP-γS, слева без него:

введите описание изображения здесь

Полосы, которые видны в обоих экспериментах, представляют собой неспецифическое связывание. Если GTP-γS не влияет на их присутствие, механизм, с помощью которого они связываются с колонкой, не может быть специфичным для функциональности GTPase.

Белки, за которыми охотились авторы, это те, которые присутствуют в эксперименте без GTP-γS, но не элюируются в эксперименте с GTP-γS. Они связываются через функциональность GTPase с GTP на колонке. На рисунке они отмечены стрелками.

Общая идея этого контрольного эксперимента состоит в том, чтобы отличить специфическое связывание от неспецифического связывания с колонкой. Возможность сделать это означает, что у авторов было меньше белков, необходимых для дальнейшего исследования, что сэкономило им часть работы.

Связывает ли GTP-γS (GTP gamma S) все GTP-связывающие белки?
СпросиСетьПолитика конфиденциальности1y, 0v