Какие факторы модифицируют общую дифференциальную экспрессию генов путем введения вектора для сверхэкспрессии одного гена?
Если вы сверхэкспрессируете ген белка, участвующего в передаче сигнала (например, киназы, каркаса или рецептора), путем трансфекции векторной клетки, а затем перегружаете клетку, используя этот сигнальный путь, полезно изолировать этот путь и изучить его.
Есть ли способ изменить общую экспрессию генов или паттерн дифференцированной экспрессии клеток путем трансфекции генов? Я думаю, это сработает, если вы доставите ген сверхэкспрессии в белки, участвующие в процессинге РНК (например, сплайсинге, рибосомных белках и т. д.), транскрипции РНК (например, TF) или трансляции белка.
Какие факторы изменяют общую дифференциальную экспрессию генов путем введения вектора для сверхэкспрессии одного гена?
Это очень актуальный вопрос, и области экспериментальной биологии необходимо пересмотреть экспериментальные стратегии.
Одно из объяснений, которые вы дали, правильное: сверхэкспрессированный белок может подавлять клеточные процессы.
Другая проблема, порождаемая этой практикой, — неверный вывод. Нас больше всего интересует, что белок делает в клетке в общих физиологических условиях. Если стехиометрия изменена, обязательно появятся неверные результаты. Например, в случае репрессора/активатора с несколькими мишенями: при его общей физиологической концентрации он может не активировать ген-X на самом деле из-за низкого сродства, но в высоких концентрациях он просто может, и в итоге мы приходим к выводу, что ген-x является цель репрессора-1 в эксперименте OVEREXPRESSION.
Синтетический биологический подход очень хорош при изучении небольших сигнальных/транскрипционных модулей . Весь модуль можно клонировать и экспрессировать в клетке под индуцируемым/конститутивным промотором. Это может быть реализовано и в гетерологичной клетке. Математическая модель обычно помогает делать определенные прогнозы.
Другие стратегии, которые можно использовать вместо избыточной экспрессии:
Существует множество различных векторов сверхэкспрессии (обычно это промоторы/регуляторные элементы, расположенные выше трансфицированного гена). Вот пример сверхэкспрессионного вектора (вектор сверхэкспрессии pCAMBIA1300S), который использовался для сверхэкспрессии фактора транскрипции, называемого NAC, в рисе, что привело к значительным фенотипическим изменениям (засухоустойчивость и солеустойчивость): http://www.ncgr.ac.cn/articles /2009ZhenXN_NAC.pdf
Бобтеджо
Ноам Кремен
фриролл