Отвечая на мой предыдущий вопрос , я немного читал о поли - D -лизине, коллагене I, коллагене IV, ламинине и других покрытиях тканевых культур, которые способствуют адгезии клеток. Я всегда предполагал, что что-либо, кроме стандартного пластика или стекла, обработанного TC, значительно увеличит фон, но, возможно, мои взгляды на фоновую флуоресценцию немного устарели. Есть ли у кого-нибудь опыт работы с ними в среде флуоресцентной микроскопии/высокопроизводительного скрининга?
В частности, в моем случае я рассматриваю эндоцитоз и перенос меченого белка в лизосому . Я помечаю белок pH-зависимым красителем pHrodo TM от Molecular Probes, который предположительно имеет очень слабую флуоресценцию при нейтральном pH, но становится очень ярким, когда pH падает, когда эндоцитарные везикулы превращаются в лизосомы. Теоретически это означает, что окончательный этап промывки не требуется, но с матричным покрытием на пластинах меня беспокоит фон.
Итак, каково текущее мнение относительно фоновой флуоресценции различных матриц TC? Источником фона является сама матрица или флуоресцентный краситель адсорбируется на ней? Зависит ли это от длины волны? К счастью, я могу не застрять со своими плохо прилипающими клетками, и мне, возможно, вообще не понадобится дополнительная матрица, но я все же хочу лучше понять, как она работает.
Внеклеточный матрикс (ECM) флуоресцирует, особенно коллаген и ламинин. Максимум находится в каналах DAPI и FITC, а флуоресценция становится слабее в сторону более длинных волн. Однако, поскольку покрытие колб TC очень тонкое, я не думаю, что это будет проблемой. Лучше всего просто попробовать. Существует также довольно известный документ, который может быть полезен: