RNeasy Mini Kit с низким соотношением 260/230 — могу ли я очистить эту РНК для дальнейшего использования?

Я использовал набор Qiagen RNeasy Mini Kit для выделения РНК из 5*10^5 C28/I2 (иммортализованных хондроцитов человека). Тем не менее, мой выход низкий (~ 25 нг / мкл), но мое соотношение 260/280 велико (~ 2,3), а мое соотношение 260/230 трагическое (~ 0,06). Я уже выбросил спин-колонку, но я хотел бы знать, 1) смогу ли я увеличить соотношение 260/230 для 40 мкл экстрагированной РНК и 2) смогу ли я осадить РНК из раствора, чтобы сделать более концентрированный раствор.

Пожалуйста, дайте мне знать, если потребуется дополнительная информация.

Спасибо!

Вы можете легко осадить РНК, используя этанол или изопропанол. Перед этим я бы тоже сделал фенол-хлороформную экстракцию. Но имеет ли это смысл? Когда вы работаете с клеточной линией, я предпочел бы сделать новый препарат, чем тратить время и деньги на сохранение низкокачественной РНК.
Эти клетки растут очень медленно, и у меня есть простая ПЦР, которую мне нужно провести в течение следующих нескольких дней, поэтому в идеале я бы хотел сэкономить на ней. Просто раньше у меня таких проблем не было. Как осадить РНК этанолом?
Изменяли ли вы количество буфера RLT в мини-наборе Qiagen RNAeasy? Если да, то сколько вы использовали?

Ответы (1)

Набор RNAeasy обычно не содержит фенольных соединений. Ваши плохие 260/230, возможно, из-за низкой урожайности; проверьте абсолютные значения абсорбции. Низкий 260/230 (и низкий выход) также происходит из-за неправильного лизиса. Я бы посоветовал вам провести лизис клеток более эффективными методами. Я бы не советовал еще одну стадию осаждения фенолом-хлороформом или спиртом - вы потеряете свою РНК. С тем, что у вас есть сейчас, проведите немного по гелю, чтобы увидеть целостность. Также попробуйте нагреть растворенную РНК при 65-70 градусов в течение 10-15 минут и снова измерить ОП (используйте нанокапли или подобное устройство).

Я считаю, что низкое соотношение 260/230 указывает на загрязнение гуанидином. Насколько мне известно, «буфер RLT» RNeasy содержит гуанидин.
Оно делает. но очистка на основе колонки обычно не оставляет этих загрязнений.
Как вы их лизировали? WYSIWYG, вероятно, на что-то здесь.
RNeasy Mini Kit с низким соотношением 260/230 — могу ли я очистить эту РНК для дальнейшего использования?
СпросиСетьПолитика конфиденциальности1y, 0v