При использовании прекультуры с ампициллином для экспрессии белка я должен избавиться от среды для прекультуры, чтобы избежать переноса слишком большого количества бета-лактамаз, которые разрушат ампициллин в основной культуре. Для этого я гранулирую клетки и ресуспендирую.
Какие методы ресуспендирования лучше всего подходят, если впоследствии вам нужны живые бактерии? Я не уверен, какую силу я могу применить, не нанося вреда бактериям, а очень аккуратное ресуспендирование занимает очень, очень много времени.
Какие методы можно использовать для ресуспендирования живых бактерий и какие из них являются самыми быстрыми?
Если предположить, что вы говорите о кишечной палочке : пока вы ресуспендируете клетки в подходящей жидкости, например, в свежей среде или буфере, то, исходя из моего опыта, вам не о чем беспокоиться - клетки очень устойчивы. Я обнаружил, что разные штаммы и условия роста дают гранулы с очень разными качествами - некоторые из них достаточно хорошо ресуспендируются при встряхивании. Если осадок кажется комковатым, то растирание — это то, что я всегда находил эффективным — пипеткой вверх и вниз, пока осадок не развалится.
Если вы собираетесь провести какие-то физиологические измерения с ресуспендированными клетками, это может потребовать некоторой проверки, но если вы собираетесь только повторно вырастить и вызвать экспрессию, я бы сказал, что дайте клеткам некоторое время для восстановления в новой среде (проверьте, что абсорбция увеличивается) перед индукцией экспрессии должно быть достаточно.
Пипетирование вверх и вниз ОСТОРОЖНО, чем медленнее вы пипетируете и чем толще наконечник, тем мягче оно будет, или встряхивание МЕДЛЕННО, высокая скорость вортексирования приводит к сдвиговому усилию на стенке, точно так же, как при быстром пипетировании маленькими наконечниками
Бактерии могут многое выдержать, больше заботиться о дрожжах и еще больше заботиться о клетках млекопитающих.
шигета