Хорошая техника пипетирования?

Хорошая техника пипетирования важна для многих биологов, но ее бывает трудно сделать правильно. Когда я беру 1 мкл жидкости с помощью микропипетки, мне кажется, что я всегда беру меньше 1 мкл, и это количество изменчиво/непостоянно. Я хотел бы знать, что может быть не так.

Какова правильная техника пипетирования? Может пипетка неточная?

Добро пожаловать в Biology.SE. Вы должны попытаться дать больше информации о моменте, когда вы поняли, что не выпили ровно один микролитр. Вы прямо в пипетке видите, что не набрали 1 мкл. Или у вас иногда есть остатки в пипетке, а иногда нет. Вы думаете, пипетка, которую вы используете, может быть причиной?
Я не удивлюсь, если ваша пипетка нуждается в обслуживании. Некоторые детали (резиновые кольца), важные для правильной работы, изнашиваются и время от времени нуждаются в замене.
Я отозвал свой закрытый голос, хорошая техника пипетирования важна во многих биологиях. Общая информация о технике пипетирования будет полезна.
Этот пост можно сделать вики сообщества , но я оставлю это решение на усмотрение ОП и @rg255.
Какую пипетку вы использовали? Вам не поможет 10 мл. Используйте самый маленький, который вы можете найти. Кроме того, когда вы используете одну пипетку для объединения всех растворов, и эта пипетка имеет систематическую ошибку (т. е. калибровка необходима, но не выполнена), тогда нет проблем, поскольку все дело в относительных объемах. Если вы используете несколько пипеток для объединения жидкостей в реакционную смесь, возникают проблемы.

Ответы (2)

Вот несколько пошаговых советов по правильной технике пипетирования:

  1. Убедитесь, что пипетка настроена на правильный объем
  2. Убедитесь, что наконечник надежно закреплен
  3. Держите пипетку вертикально при пипетировании
  4. Медленно и плавно нажмите на поршень до нужной точки (положение первой остановки).
  5. Вставьте наконечник в жидкость для пипетирования. Убедитесь, что наконечник правильно погружен в жидкость, но не касается/рядом с поверхностями контейнера.
  6. Медленно и плавно отпустите поршень назад , удерживая пипетку в вертикальном положении и опустив наконечник и следя за тем, чтобы не образовывались пузырьки — вы можете попробовать предварительное смачивание (см. видео по ссылке ниже, около 3:00)
  7. Вынуть пипетку из жидкости
  8. Осторожно вылейте жидкость в нужный контейнер, плавно нажимая на поршень до второго упорного положения (полностью нажатого), следя за тем, чтобы вся жидкость выливалась без разливов или брызг .

«Поместите наконечник под углом 45 градусов к стенке контейнера, затем начните нажимать вверх до первого упора, затем надавите до второго упора, держите поршень нажатым, извлеките пипетку и проверьте, находится ли капля в контейнер и наконечник пипетки пусты" - Кристиан

  1. Откажитесь от наконечника с помощью поршня выпуска

Также убедитесь, что у вас правильный размер/тип наконечника и вы используете подходящую пипетку (например, не используйте пипетку на 10–100 мкл для 120 мкл).

Если это по-прежнему приводит к неправильным измерениям, возможно, вам необходимо откалибровать пипетку.

Проверьте пипетку, взяв несколько образцов. Если пипетируемый объем является постоянным, но неверным (например, всегда на 10% ниже целевого значения), это означает, что пипетку необходимо откалибровать, и, вероятно, это не неправильный метод. Если он непостоянен (как недостаточное, так и чрезмерное дозирование), то это либо метод, либо пипетка (плохие/поврежденные пипетки могут быть непостоянными, плохо, но хорошо откалиброванные пипетки, скорее всего, будут последовательными и нуждаются только в калибровке).

Попробуйте использовать несколько пипеток, если они одинаковы, но между ними есть различия (пипетка 1 всегда ниже на ~10%, пипетка 2 всегда больше на 15%, пипетка 3 всегда больше на ~2%...), тогда ваш техника хороша, и вам нужны пипетки получше. Также наймите опытного пипетщика, чтобы проверить вашу технику и попробовать сами пипетки.

Калибровка может быть выполнена внутри лаборатории лаборантами или внешними специалистами, поговорите с ответственным лицом вашей лаборатории.

Также посмотрите это видео , которое хорошо объяснено.

Дополнительный момент : следует соблюдать осторожность при пипетировании поверхностно-активных веществ и вязких жидкостей. Жидкости, содержащие поверхностно-активные вещества, должны быть тщательно перемешаны перед дозированием, и следует избегать смешивания пипеткой непосредственно перед дозированием (с одним и тем же наконечником). Многократное пипетирование создает пузырьки внутри наконечника и приводит к забору меньших объемов. Вязкие жидкости следует осторожно пипетировать, при этом следует соблюдать осторожность, чтобы жидкость не прилипала к внешней стороне наконечника.
Также рекомендуется попрактиковаться в пипетировании серийных разведений цветных соединений, а затем измерить оптическую плотность каждого из них и нанести ее на график. Если у вас неправильный наклон, вам нужно продолжать практиковаться или починить пипетки.
Прошло много времени с тех пор, как я держал его, но исх. шаг 8) - не следует ли всегда ставить наконечник под углом 45 градусов к стенке контейнера; затем начните нажимать вверх до первой остановки; затем протолкнуться до второй остановки; удерживая поршень нажатым, извлеките пипетку и проверьте, находится ли капля в контейнере, а наконечник пипетки пуст? Затем слегка постучите по контейнеру, чтобы убедиться, что капля находится на дне контейнера?

Прежде всего, мне нужно сообщить, что я работаю на Эндрю Альянса , но я отвечаю ради предоставления информации, а не в коммерческих целях. То, что вы испытываете, зависит, как мы измерили с помощью нашего робота, от влажности окружающей среды. если внутри наконечника испаряется 1 нл жидкой воды, из-за низкой влажности окружающей среды над уровнем жидкости будет 1 мкл водяного пара, поэтому объем пробы уменьшится на 1 мкл. Вы можете проверить это явление, извлекая наконечник из жидкости, восстанавливая давление воздуха и сохраняя влажность внутри наконечника, а также повторно всасывая жидкость. Собственно поэтому калибровочные лаборатории работают при 70% влажности окружающей среды...

Интересная деталь, никогда об этом не задумывался.
Хорошая техника пипетирования?
СпросиСетьПолитика конфиденциальности1y, 0v