Я читал эту небольшую «статью» о гомологичной рекомбинации и нокауте мыши. Согласно этой статье, вы сначала удаляете эмбриональные стволовые клетки из бластоцисты серого меха, затем вставляете конструкцию и помещаете ее обратно в бластоцисту. Далее в тексте говорится:
У мышей с нокаутом оба аллеля определенного гена заменены неактивным аллелем. Обычно это достигается путем использования гомологичной рекомбинации для замены одного аллеля с последующим двумя или более поколениями селективного разведения до тех пор, пока не будет выделена размножающаяся пара, в которой оба аллеля целевого гена инактивированы или нокаутированы.
Однако чего я здесь не понимаю, так это того, что у нас есть клетки эмбриона и, следовательно, есть клетки с обоими аллелями. Следовательно, области, окружающие эти аллели, будут гомологичны, так почему же этот шаг может привести к получению гетерозиготных (и, следовательно, впоследствии требующих селективного размножения) мышей вместо непосредственно гомозиготных?
Это просто вопрос вероятности. Если вероятность замены одного аллеля равна p , то вероятность замены двух аллелей будет равна p 2 (обратите внимание, что последняя будет меньше, поскольку вероятности меньше единицы).
Если у вас есть селектируемый маркер, такой как GFP, вы в конечном итоге выберете как гетерозигот, так и гомозигот, но частота первых будет намного выше, особенно если учесть тот факт, что вероятность опосредованного гомологичной рекомбинацией нокаута/ин очень высока. низкий в клетках млекопитающих ( 10-7 – 10-5 ) . Следовательно, инбридинг — более простой способ получения гомозигот, чем скрининг ЭСК. Более того, селекция неизбежна, поскольку в первом раунде будут даваться только химеры (не все ЭСК заменяются модифицированными).
Такие технологии, как CRISPR, сейчас используются для ускорения замены генов.
КингБуми
WYSIWYG