Проточная цитометрия для изучения клеточного цикла

Я снова размещаю здесь свои данные проточной цитометрии, потому что понимаю, что есть много людей, которые готовы мне помочь, и я могу многому научиться у вас, ребята.

В этой лаборатории клеточных культур мы используем лимфобласт Cell U-937. И мы хотим узнать, как мы можем анализировать клеточный цикл с помощью проточной цитометрии.

Может ли кто-нибудь помочь мне объяснить, как читать результаты проточной цитометрии, связанные с клеточным циклом? Я буду очень рад учиться у вас, ребята.

Заранее спасибо!введите описание изображения здесь

Ответы (1)

В основе анализа данных проточной цитометрии в отношении клеточного цикла лежит тот факт, что синтез ДНК происходит в S-фазе, поэтому клетки до S-фазы (G0/G1) имеют вдвое меньше ДНК по сравнению с клетками после S-фазы ( Г2). [М-фаза слишком короткая, чтобы иметь какое-либо значение для такого рода анализа]. Сигналы, которые имеют меньше ДНК, чем клетки из фазы G0/G1, представляют собой либо артефакты, либо апоптотические клетки с разорванной ДНК (они помечены как суб-G1).

Для измерения количества ДНК на клетку используют краситель PI (йодид пропидия), так как он количественно связывается с ДНК. Поэтому распределение сигнала PI можно рассматривать как распределение различных стадий клеточного цикла.

Эта статья в Википедии также более подробно объясняет анализ и содержит дополнительные ссылки.

Спасибо за ваш ответ! И могу я спросить, что представляет собой 100% Sub G1 в Unstained control? Это тоже мертвая клетка? или просто популяция клеток до прохождения клеточного цикла? @Николай
@Sokviseth В неокрашенный образец не добавлялся краситель PI. Поэтому вы не можете обнаружить в этих клетках ДНК (даже если она там есть), поэтому вы не можете сказать, в какой части клеточного цикла они находятся. Этот контроль выполняется только для проверки проблем с окрашиванием PI.
Ах я вижу :-). И мне интересно еще одно, почему количество клеток в (точечный график) None меньше, чем у рапамицина (87,8 против 91,4). Поскольку рапамицин может ингибировать клеточный цикл, почему количество клеток увеличивается? @Николай
Проточная цитометрия для изучения клеточного цикла
СпросиСетьПолитика конфиденциальности1y, 0v