Агарозный гель Лестничный мазок

У нас проблемы с электрофорезом в агарозном геле. Пару месяцев назад это работало, но теперь лестница всегда выглядит смазанной. Мы поменяли компоненты (1x TBE, 100bp ладдер, другой тип агарозы и напряжение) и оборудование. Мы также пробовали 1,2%, 1%, 1,5% и 2% агарозу.

Буду признателен, если кто-нибудь сможет нам помочь.

введите описание изображения здесь

Альтернативная лестница была новой, агарозой? Если все ваши компоненты старые или неправильно хранились или обращались с ними и, таким образом, ухудшились, вы получите смазывание.

Ответы (2)

Вы уверены, что ваш КЭ находится в правильном разведении? И что вы используете ТВЕ для изготовления геля, а также в качестве буфера для бега? Такая волнистая линия выглядит так, как если бы вы сделали гель с водой вместо буфера или использовали воду вместо буфера. Вы также можете попробовать использовать TAE для создания / запуска геля в качестве проверки работоспособности.

Я поддерживаю возможность отливки гелей с водой вместо буфера TBE. Это классическая ошибка, которую многие люди совершают впервые в лаборатории. Другой классикой было бы изготовление гелей из запаса 10x TBE и использование 1x TBE для прогона.

Попробуйте еще больше увеличить концентрацию агарозы, так как похоже, что у вас хорошее разделение маленьких полос и плохое разделение больших полос. Также попробуйте свежую партию агарозы.

Я бы посоветовал попробовать 2-4% с шагом 0,5%.

Если вы работаете с фрагментами размером 100 п.н. или меньше, содержание агарозы должно быть в диапазоне 4%.

Вот хороший пример диапазонов агарозы и минимальной разницы продуктов ПЦР, которые можно разрешить. https://www.qiagen.com/mx/resources/faq?id=1b23a0b3-32b4-4c1b-bd84-49b4b6a58311&lang=en

Агарозный гель Лестничный мазок
СпросиСетьПолитика конфиденциальности1y, 0v