Что вызывает перекос лестничных полос на агарозном геле?

Я часто сталкивался с проблемой, когда полосы моей лестницы перекашивались. Что вызывает это?

Вот пример: 0,7% агарозный гель, 100 В, 60 минут. Та же проблема возникает с 1%. Я загрузил 10 мкл 20 мкл реакции ПЦР.

введите описание изображения здесь

Как видите, проблема не в улыбке как таковой. Сами дорожки довольно вертикальные и прямые. Только сами полосы кажутся деформированными. Что может вызвать эту проблему?

Лестница и дорожка рядом с ней выглядят перегруженными. Старайтесь использовать меньше. Кроме того, если возможно, не используйте дорожки по бокам гелей, оставьте их пустыми, если можете. Вы повторно используете буфер? Возможно, вам придется заменять его чаще.
0.2u Отфильтруйте растворы, которые вы используете для изготовления гелей, и не перегружайте гель, он перегружен.
@ user137 Почему вы рекомендуете не пользоваться боковыми полосами?
@Chris Это может быть просто совпадение, но, похоже, у меня больше шансов получить проблему с лестницей, если я поставлю ее в боковые линии. Может быть, это просто электроды в моей коробке с гелем, или, может быть, это была проблема с моими ранними гелями, прежде чем я научился не перегружать дорожки, но я избегаю боковых дорожек, когда это возможно, и у меня было меньше проблем.
Я никогда не видел этой проблемы, когда коробка с гелем была в порядке. Коробки, в которых несколько гелей работали странно, обычно имели проблемы с проводкой электродов.
Не могли бы вы принять ответ, который удовлетворительно отвечает на ваш вопрос? Это хороший жест по отношению к людям, которые дают ответы. У вас все еще есть много открытых вопросов с правильными ответами. Если ответ не подходит, используйте комментарии или отредактируйте вопрос.

Ответы (1)

Если лестница находится на краю геля, это может быть отросток разной плотности в результате того, как гель остыл (или слишком медленно наливался). Я загрузил больше ДНК в гель, и это не вызывает у меня такой деформации. Возможно, буфер лестницы отличается от того, который используется для изготовления геля. Ваши полосы не выглядят особенно четкими, поэтому я подозреваю, что рабочее напряжение слишком высокое и вызывает нагрев поверхности геля и, следовательно, «размазывание» полос. Попробуйте включить напряжение 75 В в течение пропорционально более длительного времени, чтобы увидеть, решит ли это вашу проблему.

Что вызывает перекос лестничных полос на агарозном геле?
СпросиСетьПолитика конфиденциальности1y, 0v