Можно ли получить одиночные нити ДНК в растворе? [закрыто]

Обычно в типичном протоколе ПЦР есть этап денатурации , см., например , здесь , который служит именно этой цели: нити разделяются термически (обычно при 95 °C в течение нескольких секунд). Как видите, это очень распространенный процесс, но пряди остаются денатурированными только при высоких температурах.

Разделение цепей при комнатной температуре в обычных буферных растворах будет очень трудным, потому что отжиг (противоположный процесс, при котором две комплементарные цепи спариваются) термодинамически выгоден. Более надежное разделение может быть достигнуто путем растворения ДНК в определенных растворах, как описано здесь , где ДМСО кажется особенно эффективным. Это приводит к разделению нитей при комнатной температуре, но обе нити явно все еще присутствуют. Можно подумать о том, чтобы разделить их с помощью различных методов ( например , ВЭЖХ), но я сомневаюсь, что эти решения совместимы с обычными колонками ВЭЖХ.

Я добавил этот ответ, потому что комментарий к принятому ответу предполагает, что они заинтересованы в выделении отдельных цепей двухцепочечной ДНК.

Одноцепочечные ДНК можно разделить с помощью электрофореза денатурированной двухцепочечной ДНК в полиакриламидном геле.

Мечение концов двухцепочечной ДНК с последующим разделением цепей было ключевым методом при секвенировании ДНК методом Максама-Гилберта (химическое секвенирование). Рисунок ниже взят из этой статьи .

Для этого эксперимента фрагменты двухцепочечной ДНК метили по концам (радиоактивная метка), затем нити разделяли путем нагревания до 65°C в 10M мочевине. Образец быстро охлаждали и затем наносили на полиакриламидный гель. (Поскольку две нити двухцепочечной ДНК обычно имеют разный состав оснований, они будут разделены во время электрофореза.) Затем полосы ДНК визуализировали с помощью авторадиографии. Как поясняется в статье, отсутствие второй полосы для фрагмента 165 п.н. является артефактом метода мечения (т.е. одна цепь была немеченой, а видимая полоса представляла собой одноцепочечную ДНК). Как видите, кроме самого маленького фрагмента, этим методом были разрешены отдельные пряди. После разделения эти оцДНК могут быть выделены из ломтиков геля.

Однако я не думаю, что этот метод будет полезен для больших ДНК, потому что гель не сможет их достаточно хорошо разрешить.