Почему ПЭГ важен для эффективной трансформации дрожжей?

Одним из способов трансформации дрожжей является использование ацетата лития, одноцепочечной ДНК-носителя и ПЭГ (1) . Мне было интересно, почему полиэтиленгликоль важен для эффективной трансформации. Как это влияет на поглощение чужеродной ДНК? Yamakawa et al (2) показали, что ПЭГ необходим для восстановления клеток, но я не смог получить доступ к этой статье, чтобы узнать об этом больше.

1. Р. Дэниел Гитц и Роберт Х. Шист (2007). Высокоэффективная трансформация дрожжей с использованием метода ДНК-носителя LiAc/SS/ПЭГ

2. Ямакава М., Хисинума Ф. и Ганге Н. (1985). Трансформация интактных клеток Saccharomyces cerevisiae полиэтиленгликолем. Агр. биол. хим. 43, 869-871.

ПЭГ вызывает слияние протопластов (в основном липидных бислоев)
Я нашел эту статью, которая может ответить на ваш вопрос: Shigeyuki Kawai1, Tuan Anh Phan1, Emi Kono1, Kazuo Harada2, Chihiro Okai2, Eiichiro Fukusaki2 и Kousaku Murata1 (2009). Транскрипционный и метаболический ответ в клетках дрожжей Saccharomyces cerevisiae во время полиэтиленгликоль-зависимой трансформации. Journal of Basic Microbiology 2009, 49, 73–81 Я думаю, что это правильная ссылка: onlinelibrary.wiley.com/store/10.1002/jobm.200800123/asset/…
Это скорее комментарий, но я не могу его добавить из-за своих очков репутации. В дополнение к тому, что уже добавили другие, мне также сказали, что ПЭГ помогает стабилизировать дрожжевые клетки, тем самым увеличивая их восстановление. Я не могу поделиться статьей о протоколе природы от Gietz et al, но это глава книги тех же авторов на ту же тему: researchgate.net/profile/R_Gietz/publication/…

Ответы (2)

http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/26634.html

Я нашел эту ссылку - там написано "на самом деле мы не знаем". Там говорится, что ПЭГ связывается с ДНК, я предполагаю, что он защищает мембрану от ее отрицательного заряда и позволяет произойти интернализации.

Я предполагаю, что амфипатическая природа ПЭГ, будучи частично гидрофобным, также помогает смягчить мембрану. Интересно, что если увеличить концентрацию ПЭГ за пределы допустимого, то эффективность процедуры снижается.

Я предполагаю, что он имеет аналогичную функцию в буферах лигирования. Там он, по-видимому, занимает большую часть объема и тем самым увеличивает вероятность взаимодействия между фрагментами ДНК.

В буфере трансформации это должно увеличить вероятность попадания ДНК в клетку. К сожалению, единственная ссылка, которую я нашел для этого, была на Bitesizebio: http://bitesizebio.com/20/5-dna-ligation-tips/

Почему ПЭГ важен для эффективной трансформации дрожжей?
СпросиСетьПолитика конфиденциальности1y, 0v