Удалить РНКазу из пипеток?

В нашей лаборатории используются старые пипетки Gilson Pipetman. Я использовал некоторые из них для создания мРНК путем транскрипции in vitro и начал сталкиваться с проблемами РНКазы. Я пытаюсь очистить все, включая пипетки. Я не уверен, что эти старые пипетки можно автоклавировать, по крайней мере, целиком, я думаю, что смогу разобрать их и автоклавировать те части, которые могут соприкасаться с растворами. Есть ли способ эффективно промыть пипетки и удалить любые РНКазы?

Я использую коробки с барьерными наконечниками, не содержащими РНКазы, выполняю всю свою работу с новыми кусочками алюминиевой фольги, использую коммерчески доступную воду, не содержащую РНКазы, перчатки, лабораторный халат, маску для лица и т. д. Однако выходы из набора для транскрипции in vitro были снижены, а выходы из хвостовой набор еще хуже, иногда теряя 90% РНК. Я мало что могу сделать, наше здание старое и полное пыли, а чертовы трубы над моим рабочим столом протекают (протекают все трубы, за последние 6 месяцев было 2 крупных прорыва труб).

Придется, наверное, покупать новые комплекты. Просто нужно доказать моему консультанту, что наборы заражены.

Я бы разобрал пипетки и поместил соответствующие части в раствор DEPC. Я бы также рассмотрел другие проблемы, помимо РНКаз, снижение урожайности может иметь много разных причин.
Я разобрал пипетки и обработал нижние части ультразвуком в RNAse Away, промыл в ddH2O, затем в 70% этаноле, а затем в автоклаве. Собрал с новыми уплотнениями и уплотнительными кольцами и проверил калибровку. Они вроде пока в порядке. Пользуюсь этим же набором около 3-4 месяцев, так что у него было много заморозок-оттепелей. Все равно скоро придется заменить. При запуске денатурирующих гелей вместо полос видны мазки, что свидетельствует о деградации.
Я бы также заменил все ингредиенты для вашей транскрипции in vitro, если у вас есть какие-либо проблемы с РНКазой. Вы также можете разделить запасы на аликвоты, чтобы ограничить ущерб, причиняемый контаминацией, и защитить более чувствительные запасы. Некоторые вещи просто портятся быстрее, DTT должен быть достаточно свежим, а NTP также становятся заметно хуже, если они старше. Но мы тоже не используем наборы, а готовим все в нашей лаборатории.
протрите горловину пипетки средством RNAseZap/RNAseAway и используйте наконечники с фильтром для эксперимента. Разложение происходит не только из-за загрязнения пипеткой — проверьте пластиковую посуду — пробирки, наконечники, резервуары с гелем и т. д. Также проверьте буфер, который вы используете для своих гелей (был ли он автоклавирован, pH в порядке). А если в вашем здании пыльно, вы можете проводить эксперименты в ламинарном колпаке.

Ответы (1)

Согласно Руководству пользователя Gilson Pipettman , вы можете автоклавировать следующие детали: выбрасыватель наконечника, держатель наконечника и соединительную гайку (если вы не уверены в деталях, просмотрите ссылку в формате PDF выше). Все остальные части нельзя автоклавировать. Гилсон говорит, что можно использовать следующие условия (стр. 17 в руководстве пользователя): Автоклавирование в течение 20 минут при 121°C, 0,1 МПа.

Однако, когда у вас действительно есть загрязнение ДНКазой, вы не избавитесь от нее с помощью автоклавирования, так как РНКазы слишком стабильны. Вы можете либо попробовать различные растворы на рынке, предназначенные для уничтожения РНКаз, либо просто получить новый набор пипеток, используемых только для работы с РНК (на другом столе в другой лаборатории с совершенно другим и свежим набором химикатов и пластиковой посуды). . И я бы порекомендовал подсказки с фильтром для этой работы. Они дороже, но в долгосрочной перспективе это сэкономит деньги, так как вам не придется повторять эксперименты.

Относительно протекающих пипеток: пипетки содержат резиновые кольца и тефлоновые уплотнения внутри, которые необходимо время от времени заменять. На изображении ниже показано, как (части C и D) кольцо можно купить у Гилсона. Если вы не знаете, как выполнять эту работу (и у вас нет специалиста), вы также можете отправить пипетки на сервисное обслуживание. Это стоит немного денег, но это намного лучше, чем использование ненадежных, протекающих пипеток.

введите описание изображения здесь

И не волнуйтесь, пипетки Gilson довольно хороши. Я использовал сейчас более или менее все бренды на рынке, и я все еще предпочитаю их. Они нуждаются только в некоторых услугах время от времени.

Пипетки не текут, трубы текут. Это проблема с сантехникой. Я сейчас чищу пипетки, и у меня есть запасные уплотнения и уплотнительные кольца, так что, надеюсь, эта проблема будет решена. Без сантехника трубы не починишь.
Трубы. Я как-то сделал это в пипетки здесь. Наверное, у меня тоже было слишком много дырявых :-)
Удалить РНКазу из пипеток?
СпросиСетьПолитика конфиденциальности1y, 0v