Было проведено шесть независимых экспериментов по трансформации эксплантов листьев табака с использованием двух разных конструкций - (1) конструкция I, содержащая только ген устойчивости к гигромицину. в качестве маркера селекции и (2) конструкции II с ген в качестве маркера селекции и ген-пассажир, кодирующий фермент дефосфорилазу который ингибирует фосфорилирование в клетках, в которых он экспрессируется. Маркер, а также гены-пассажиры были помещены под транскрипционный контроль конститутивного промотора. , который экспрессируется во всех клетках/тканях. Полученные результаты представлены в таблице ниже.
Объясните, как ген, используемый в конструкции II, потерял свою функциональность, вероятно, из-за мутации (мутаций) либо в гене, либо в промоторе.
Мой подход: существует вероятность того, что выражение ген является летальным для трансформированных клеток.
Наличие токсичного для клетки продукта в векторе экспрессии — нередкая проблема при сверхэкспрессии белков.
Другая возможность заключается в том, что проблема заключается в самом маркере выбора. Здесь могут быть мутации как в промоторе гена, так и в самом гене, приводящие к белку, не способному защитить клетки от селекции. Обе возможности (отсутствие экспрессии и мутированный белок) оставляют гибель трансфицированных клеток, так как отсутствует защита их белком резистентности.