Я пытался понять состав плазмид, используемых при клонировании рекомбинантной ДНК, например: https://www.genecopoeia.com/wp-content/uploads/2020/02/pReceiver-M35-051818.pdf , и я интересно, какую цель имеет ген устойчивости к ампициллину при трансфекции в клетку-хозяин млекопитающего (как говорится, для чего он предназначен).
Я понимаю, что устойчивость к ампициллину используется для селекции в бактериальных клетках, так что растут только трансформированные бактерии, а ампициллин необходим для предотвращения бактериального загрязнения в культуре клеток млекопитающих, но я не понимаю, почему клеткам млекопитающих требуется ген устойчивости к антибиотик.
Спасибо
Я думаю, что вы делаете предположение, что ген устойчивости к ампициллину сохранил бы свою цель в клетках млекопитающих. Это не.
Как вы сказали, в процессе клонирования нужно только выбрать бактерии для репликации и производства большего количества.
В опубликованном вами векторе есть ген устойчивости, который влияет на клетки млекопитающих: неомицин. В этом случае после трансфекции клеток млекопитающих можно было отобрать только клетки с плазмидой путем добавления неомицина в культуральную среду клеток.
Примечание: выбор неомицина может занять некоторое время (4-5 дней) и более высокая доза, чем, например, пуромицин. Надеюсь это поможет!
Максимилиан Пресс