Как уменьшить/устранить скопление клеток в суспензии клеток СНО без использования агента против скопления?

Немного осмотревшись, я наткнулся на несколько потенциальных решений, однако они не являются окончательным ответом на ваш вопрос и требуют тестирования в ваших экспериментальных условиях, чтобы увидеть, какое из них работает лучше всего.

На этой странице содержится одно отличное предложение: отобрать клетки, которые не слипаются во время пассажа, путем объединения клеток в 15 мл среды в пробирке и предоставления слипшимся клеткам осесть под действием силы тяжести в течение 5 минут, а затем взять верхнюю часть 1 мл и пассирование, и после 20 пассажей с использованием той же техники вы сможете получить суспензию отдельных клеток. Основное предостережение заключается в тщательном отборе клеток без комков, которые могут иметь определенные свойства, которые могут быть нежелательными для интересующей вас процедуры, поэтому было бы неплохо провести некоторое профилирование экспрессии РНК, чтобы увидеть различия и, возможно, даже опубликовать его! Среди предложений на этой страницевключено использование различных концентраций Mn2+, Mg2+ и Ca2+ в вашей (пользовательской?) среде, поскольку клеточная адгезия регулируется интегринами, кадгеринами и селекциями, и в целом Mn2+ увеличивает сродство к лиганду, Mg2+ способствует адгезии к клеткам, а Ca2+ снижает клеточную адгезию как указано здесь . Вы также можете попробовать гепарин, как проверено в этой статье .на клетках CHO, и я не могу отметить, что в исследовании гепарин не снижал рост клеток, секрецию антител и антигенсвязывающую активность, хотя я не уверен, будет ли гепарин классифицироваться как агент, препятствующий слипанию, и мешает ли он со способностью клеток трансфецироваться, но это можно просто проверить с помощью трансфекции GFP и посмотреть на эффективность трансфекции обработанных гепарином и контрольных клеток, обработанных любым гепарином, в котором растворен.