Я работаю с мышиными В-клетками. Общий протокол заключается в том, чтобы держать клетки на льду, чтобы они не погибли, но я заметил, что это заставляет эти клетки агрегировать и выпадать в осадок. Я слышал предложения хранить эти клетки при комнатной температуре. Как я смогу определить, в каких условиях я должен хранить свои клетки?
Я пытался собрать клетки, чтобы подготовить их к изучению связывания клеток с антителами, а затем оценить клетки на фильтровальном планшете. Как правило, вы держите их на льду, чтобы приостановить метаболическое состояние, а также предотвратить эндоцитоз связанных молекул. Однако этот сдвиг, кажется, вызывает оседание. Как вы определяете подходящую температуру для обработки клеток и каковы обычные научные обоснования принятия таких решений.
Для отстаивания мало что можно сделать, кроме перемешивания и использования более высокой тонкой трубки и большего объема для подвешивания.
Однако для комкования, если это позволяет анализ, добавление сыворотки до [конечного] 5% поможет замедлить комкование (в краткосрочной перспективе). Вы также можете отфильтровать начальные комки, пропустив клетки через нейлоновый сетчатый фильтр (они делаются специально для потока — обычно используются с фиксированными ячейками). Я анализировал клетки на льду в темноте, вероятно, в течение 6 часов после сбора с небольшим изменением жизнеспособности, однако это, конечно, плохая практика.
Джонтремл
Бобтеджо
Бобтеджо