В настоящее время я провожу эксперимент на клетках, чтобы проверить интернализацию белка. Обычно я засевал свои клетки за день до инкубации. Это хорошо работало для клеток Hela, CHL или PANC1. Однако, когда я сделал то же самое с INS1-E и MIN6 (обе бета-клетки) после инкубации и этапа промывки, большинство клеток исчезло. Это было лучше в контроле, где я не добавлял соединение, но все же было отделено много клеток.
Поэтому я задаюсь вопросом, должен ли я засеять клетки INS1-E и MIN6 раньше, скорее за 2-3 дня до этого. Нужно ли этим клеточным линиям больше времени после разделения, чтобы снова прикрепиться?
Поиск литературы, чтобы увидеть, что из себя представляют опубликованные протоколы, является лучшим выбором. Простой документ для ячеек INS-1 я нашел здесь . Есть еще эта бумагаописывая выделение клеточной линии 832/13, полученной из Ins-1, с которой моя лаборатория (но не я лично) имеет опыт. Клетки следует пересевать только тогда, когда они почти или полностью сливаются. Для клеток Ins-1 соотношение субкультур будет составлять от 1:4 до 1:8 и займет 2-3 дня. Следует отметить, что клетки Ins-1 плохо прилипают к пластику для тканевых культур. Это нормальная часть их характеристики. Я помню, как лаборантам приходилось принимать особые меры предосторожности в отношении ингредиентов сред, чтобы предотвратить их отделение, а также очень осторожно добавлять среды в чашки, иначе слишком быстрое пипетирование приведет к смещению многих клеток и объяснит, почему ваши клетки вымываются.
Я работал с клетками MIN6 в прошлом и обнаружил, что им может потребоваться не менее 12-24 часов для полного посева (если они культивируются на полистирине). В зависимости от специфики вашего эксперимента и от того, усложнит ли это контроль, вы также можете попробовать покрыть поверхность, на которую собираетесь засеять, ламинином. Клетки MIN6, по-видимому, любят расти на полистирине без покрытия и других белках ЕСМ.
Ларри_Парнелл
пользователь560