IPTG и оператор lac с кишечной палочкой для вопроса о чужом гене

Мы провели эксперимент, в котором у нас была кишечная палочка с плазмидой с геном другой бактерии, и мы добавили IPTG для индукции. Уилл, посмотрев больше об IPTG в Интернете, я вижу, что это связано с оператором lac, который, судя по тому, что я нашел, имеет дело только с лактозой. Есть ли какая-то другая функция, которая имеет? Как это может быть связано или влиять на то, что мы вкладываем и что делаем? Мне не хватает связи здесь.

Ответы (1)

Оперон lac содержит гены, важные для метаболизма лактозы как источника энергии — обычно для этой цели используется глюкоза. Обычно оперон жестко регулируется и, пока есть другой источник энергии, находится в заторможенном состоянии.

Присутствие лактозы удаляет lac-репрессор из lac-оперона и обеспечивает экспрессию генов и, таким образом, позволяет метаболизировать лактозу. Механизм может включаться и выключаться в зависимости от наличия лактозы.

IPTG представляет собой вещество, которое имитирует присутствие аллолактозы (метаболит лактозы) и может активировать транскрипцию с оперона lac. Поскольку ИПТГ (в отличие от аллолактозы) не гидролизуется β-галактозидазой, его концентрация в клетке остается неизменной. Использование оперона lac и IPTG позволяет вам включить экспрессию гена на вашей плазмиде и начать сверхэкспрессию.

Так влияет ли оперон lac на другие вещи, помимо лактозы, на наш белок? Или в плазмиде должно быть что-то, что позволяет оператору lac управлять ею? Влияет ли присутствие или отсутствие репрессора? Я имею в виду, что то, что мы делаем, не связано с лактозой, так что я просто не понимаю, как возня с лак-репрессором влияет на то, что мы помещаем в клетку.
@windy401 В вашей плазмиде (искусственной конструкции) интересующий ген будет находиться под контролем оператора lac. Lac-репрессор может конститутивно экспрессироваться из другого гена на плазмиде.
Наконец нашел это, и прочитав его и остальные страницы ( mfa.od.ua/page274.htm ), теперь понял. «Существенным элементом, участвующим в экспрессии lac-опосредованного белка, являются не гены lac, а регуляторный аппарат lac. Обычно ген, выбранный для сверхэкспрессии, клонируется в плазмидный вектор за промотором lac. Затем экспрессия этого гена под контролем lac, либо как независимый ген, либо слитый с фрагментом lacZ или другими генами». Я просто не понимал, как/почему наш ген контролировался чем-то, что просто контролировало лактозу.
Вы используете только промоутер оперона lac, извините за неясность. Это позволяет контролировать экспрессию целевого гена. Я отредактирую ответ позже.
IPTG и оператор lac с кишечной палочкой для вопроса о чужом гене
СпросиСетьПолитика конфиденциальности1y, 0v