Например, в этом протоколе подготовки компетентных клеток E. coli говорится:
Поместите 10 мкл клеток E. coli BL21 (DE3) на чашку с LB-агаром; инкубировать в течение ночи (12 часов).
Подготовьте 500 мл среды SOB, чтобы ее можно было предварительно нагреть в инкубаторе до 37 градусов Цельсия накануне.
Выберите одну выбранную колонию и инокулируйте в 5 мл среды SOB и выращивайте в течение 16 часов при 37 градусах Цельсия и 250 об/мин в шейкере.
Инокулировать 500 мл предварительно подогретой среды SOB с 5 мл свежей ночной культуры.
а затем в протоколе сверхэкспрессии белков после трансформации этих клеток я в основном следую тем же шагам, что и выше, но на этот раз без предварительного нагрева жидкой среды для крупномасштабной инокуляции. Почему это?
Это потому, что E.coli BL21(DE3) являются компетентными клетками. Компетентность является ключом здесь, поскольку клетки были химически обработаны, поэтому трансфекция может быть выполнена с помощью теплового шока с высокой эффективностью.
Это означает, что эти бактерии довольно хрупкие из-за химической обработки и поэтому очень чувствительны как к механическим, так и к тепловым ударам.
Предварительный нагрев среды просто позволяет избежать повреждения клеток и максимизирует скорость роста.
МэттДмо
243