Я был дураком и растворил свой антибиотик (канамицин) в Tris Buffer, а не в H₂O. Канамицин, похоже, все еще действует, но коллега по лаборатории упомянул, что Трис возится с проницаемостью мембран клеток. Мне было любопытно, в какой степени это на самом деле влияет на эксперименты.
В цитируемой статье описаны эффекты Триса на наружную мембрану кишечной палочки . Как и все грамотрицательные бактерии, E. coli имеет внутреннюю (или цитоплазматическую) мембрану, которая представляет собой типичную фосфолипидную двухслойную мембрану, содержащую множество мембранных белков, включая переносчики и, конечно же, цепь переноса электронов. Вокруг него находится слой пептидогликана, а затем внешний слой клеточной оболочки представляет собой наружную мембрану, представляющую собой особую (крайне нетипичную) двухслойную структуру, содержащую фосфолипиды и липополисахариды, а также ряд белков, включая порины. Пространство между двумя мембранами представляет собой периплазму или периплазматическое пространство, которое содержит ряд небольших секретируемых белков.
Внешняя мембрана подвержена разрушению при ряде обработок, включая обработку ЭДТА. Например, во многих процедурах лизиса клеток E. coli используется ЭДТА для разрушения внешней мембраны в достаточной степени, чтобы лизоцим мог получить доступ к пептидогликану.
Клетки с дестабилизированными внешними мембранами могут проявлять повышенную хрупкость, но в целом я полагаю, что обычно это не вызывает каких-либо конкретных проблем: очевидно, это будет зависеть от того, какие именно ваши эксперименты.
Наконец, стоит отметить, что концентрация Трис, которую вы будете добавлять с канамицином, должна быть довольно низкой. Даже если вы использовали 0,1 М Трис, вы, вероятно, используете 1000-кратное увеличение, поэтому конечная концентрация Трис будет только 0,1 мМ. В работе в цитируемой статье рассматривались клетки, ресуспендированные непосредственно в 0,1 М Трис. Я не думаю, что вам нужно беспокоиться об этом вообще.
Бобтеджо