Может ли «Cas9» (участвующий в механизме Crispr-cas9) рассматриваться как фермент рестрикции?

У меня много вопросов о ферменте Cas9. Когда комплекс Cas9-guideRNA (crRNA и transcrRNA) присоединен к последовательности ДНК, какой тип связи разрезает Cas9? Расщепляет ли Cas9 всю последовательность ДНК, комплементарную направляющей РНК?

Если предыдущий вопрос «Нет», то как определяется последовательность, которая будет разрезана на ДНК, комплементарной направляющей ДНК? Какой тип фермента представляет собой Cas9?

введите описание изображения здесь

Ответы (1)

Cas9 представляет собой эндодезоксирибонуклеазу ( UniProt-Q99ZW2 ). Он также обладает 3'-5'-экзонуклеазной активностью, благодаря которой он немного обрезает ДНК от места разреза (но не слишком сильно).

Хотя Cas9 является эндонуклеазой и развился как механизм иммунитета против вирусов (подобно ферментам рестрикции), они не считаются ферментами рестрикции. Одно из наиболее важных отличий заключается в том, что рестрикционным ферментам не нужна РНК или ДНК в качестве связующего звена для идентификации целевых участков в ДНК; их ДНК-связывающие домены могут сами распознавать сайты рестрикции.

Cas9 не может просто расщепить любую ДНК, комплементарную направляющей РНК. Для расщепления этого последнего необходимы последовательности PAM ( прилегающие к протоспейсеру мотивы ), прилегающие к целевому сайту.

Для получения подробной информации посетите страницу Википедии на CRISPR или прочитайте обзор .

Может ли «Cas9» (участвующий в механизме Crispr-cas9) рассматриваться как фермент рестрикции?
СпросиСетьПолитика конфиденциальности1y, 0v