Почему мы можем использовать вырабатываемые мышами антитела на тканях мышей?

Я видел, как биологи использовали первичные антитела, выращенные на мышах, в мышиной ткани, и они сказали мне, что если кровь хорошо перфузируется, то с этим методом проблем нет. Почему вторичные антитела (антимышиные) не прилипают ко всем мышиным антигенам в ткани?

Пояснение: я понимаю, что вторичное антитело очень специфично ко всем первичным антителам "класса" мыши. Могу ли я тогда спросить, почему использование вторичных антител мыши не распознает фоновые антитела в ткани, те, которые мышь произвела для себя естественным образом до того, как я добавил какие-либо из моих первичных антител? Существующие уровни первичных антител уже присутствуют у мыши намного ниже, чем уровни первичных антител, которые я добавляю?

Ответы (2)

Причина, по которой вторичное антитело распознает только первичное антитело, относительно проста: оно направлено против Fc-части первичного антитела. Поскольку эта часть видоспецифична (но постоянна для всех антител одного вида, отсюда и название «константа»), вторичное антимышиное антитело направлено против всех мышиных антител.

Общий принцип можно увидеть на рисунке (хотя это из иммуномаркировки, принцип остается прежним, изображение из Википедии ):

введите описание изображения здесь

Антимышиный вторичный распознает антитела, присутствующие в ткани. Они обычно присутствуют на низком уровне (если только вы не работаете с иммунными тканями, такими как селезенка) и вызывают лишь относительно низкий фон. Если это вызывает проблемы, вы можете обработать свой образец перед добавлением первичного блока Fc, который блокирует антитела, присутствующие в ткани, чтобы вторичное антитело больше не распознавалось позже.

Я думаю, что мы, по сути, сказали то же самое.

Антитела очень специфичны в отношении того, что они распознают (это называется эпитопом, который представляет собой небольшую часть антигена, распознаваемую конкретным антителом), и вторичные антитела создаются для присоединения к определенной части первичного антитела — вы можете добиться этого. с моноклональными АТ. Антигены могут распознаваться многими антителами (поскольку они могут иметь много эпитопов для разных антител), но обычно одно антитело распознает только несколько или, что более вероятно, один антиген в максимальной степени (поскольку специфический эпитоп, к которому оно прикрепляется, присутствует только на нескольких антигенах). или один антиген(ы)).

На вики - странице антител есть много подробностей о том, как работают АБ.

Почему мы можем использовать вырабатываемые мышами антитела на тканях мышей?
СпросиСетьПолитика конфиденциальности1y, 0v