Я хотел бы узнать подробную процедуру того, как ученые в прежние времена смогли определить местонахождение генов, подобно тому, как мы смогли определить местонахождение гена Хантингтона в 1983 году?
Самые ранние карты генома были построены из Escherichia coli путем злоупотребления конъюгацией специальных Hfr-мутантов. Я предполагаю, что вы немного знакомы с бактериальной конъюгацией — процессом переноса генетического материала между бактериальными клетками.
Обычно переносят только мобильные плазмиды. Они несут необходимые трагены для построения полового пилуса, системы репликации и переноса. Им также нужен oriT -сайт (источник передачи), на котором инициируется передача. Известной мобильной плазмидой является F-плазмида .
Некоторые мутантные клетки интегрировали F-плазмиду в свою основную хромосому посредством рекомбинации. Таким образом, они способны перенести весь свой геном в реципиентную клетку. Эти штаммы называются Hfr-штаммами (высокая частота рекомбинации), и они интенсивно использовались при картировании раннего генома.
Они обнаружили, что штамму Hfr требуется примерно 100 минут, чтобы перенести весь свой геном в другую клетку. Путем прерывания конъюгации (например, энергичным встряхиванием) перенос прерывался, и геном мог быть разделен на секции по времени переноса (10 мин, 20 мин, 30 мин и т. д.).
Функцию генов (или участков генома) выявляли путем скрещивания штаммов Hfr с дефектными мутантами. Если мутант не мог расти, например, на сахарозе, проводили несколько экспериментов по конъюгации с разным временем спаривания. Когда мутант после спаривания снова мог расти на сахарозе, проверяли время переноса. Если штамм был способен снова расти после 30 минут конъюгации, но не после 20, они знали, что гены, необходимые для роста сахарозы, находятся в 20-30-минутной области.
Потребовалось кропотливое количество экспериментов с широким спектром мутантов, чтобы построить первую карту генов E. coli , но это было сделано еще до того, как были известны даже последовательности нуклеотидов.
Просто в дополнение к Пифагиру.
Секвенирование и биоинформатика уже существовали в 1983 году, фактически Фредерик Сэнгер и его коллеги опубликовали свой автоматизированный метод секвенирования (секвенирование по Сэнгеру) в 1977 году. Они опубликовали полную последовательность бактериофага φX174. Другие методы секвенирования ДНК существовали с тех пор, как в 1970 году Рэй Ву изобрел первый.
Дэйвид
канадец
канадец