Конфокальное лазерное сканирование живых клеток Hela - рекомендации по хорошему флуорофору, который покажет хорошее движение

В последнее время я много занимался визуализацией живых клеток, в основном с использованием клеток hela, экспрессирующих некоторые химерные белки на основе EYFP. Я создаю видеотеку для студента-художника здесь, в университете, который собирается создать экспозицию, используя видео. Мне нужно много контента, чтобы сделать это успешным, и вместо того, чтобы требовать большой научной ценности, эти видео должны быть «занятыми» и хорошо выглядеть. Я ищу предложения относительно любых красителей или флуорофоров, медикаментозного лечения или условий, с которыми кто-то работал, которые покажут значительное движение/изменение/в клетке, изменение внутриклеточной локализации.... не имеет значения, просто нужно быть существенным изменением для клетки.

Я до сих пор оптимизирую систему с помощью CO₂ и т. д., и самая длинная регистрация, которую я провел, составляет около 8 часов — после этого либо клетки мертвы, либо фокальный дрейф становится слишком серьезной проблемой. Я надеюсь увидеть какое-то разделение, как только я смогу достаточно долго вести системную запись. До тех пор искал некоторые предложения относительно других возможностей.

Я использовал различные красители: hoechst, dapi, mito-tracker, draq5, er-red, rox-red. также эйфп/тубулин, эйфй/мито, эйфп/голджи, draq5. Эти красители недешевы, и я единственный, кого я знаю, что делаю это, поэтому я проверяю здесь.

Я не совсем уверен, что вы просите. Вы ищете флуофор, который хорошо виден в конфокальной микроскопии? Или вы хотите пометить белок, который много двигается? Или вы хотите видеть целые движущиеся клетки?
Спасибо, Крис, я добавил много необходимой информации к исходному вопросу.
Вы могли бы подумать о пометке белков, которые импортируются и экспортируются из ядра.

Ответы (1)

MitoSOX выглядит довольно круто. Я никогда не использовал его сам, но я уверен, что вы могли видеть, как происходит какая-то классная митохондриальная динамика. Это немного дороговато, но все краски будут.

Даже всего за 8 часов вы, вероятно, сможете увидеть несколько дивизий, что было бы круто с хёхстом.