Я использую метод для анализа всех аминокислот в образце пищи. Для этого я должен гидролизовать образец, и на последнем этапе метода я определяю аминокислоты с помощью ионообменной хроматографии. Однако при использовании этого метода из-за гидролиза глутамин превращается в глутаминовую кислоту, поэтому в моем результате я получаю большой пик глутаминовой кислоты, и я не могу прочитать глутамин.
Мой вопрос в том, есть ли метод количественного определения глютамина в образце пищи.
Редактировать: это было давно, спасибо за отзыв! В образцах, которые у меня есть, мне нужно измерять связанный глютамин, а не свободный глютамин. Это создает проблему при подготовке образца при попытке разделить аминокислоты. Я провел несколько экспериментов, и мне почти удалось использовать «ферментный коктейль», который осуществляет полный ферментативный гидролиз. Следующим шагом будет выяснить, могу ли я определить количество глютамина.
Я не так хорошо знаком с ферментативными наборами для количественного определения глютамина, но большинство наборов для анализа на основе ферментов содержат ряд довольно сильных предположений о задействованной энзимологии, и, по моему опыту, их трудно надежно использовать. Коммерческие комплекты безнадежны для устранения неполадок, поскольку их компоненты не разглашаются --- вы не знаете, с чем работаете.
Вы работаете в лаборатории клинической химии? Если это так, у вас может быть доступ к анализаторам, используемым для измерения параметров биохимии крови, а некоторые модели измеряют глютамин, например этот . Эти инструменты также основаны на ферментативном анализе, но они тщательно тестируются, поскольку используются в медицине, и поэтому я считаю их более надежными, чем обычный набор Sigma.
На мой взгляд, лучшей альтернативой является масс-спектрометрия или ЯМР. Глутамин легко измерить на любой установке ЖХ-МС или ГХ-МС (хорошо подойдет старый тройной квадруполь), он хорошо ионизируется в положительном режиме электрораспыления, хорошо удерживается на типичной колонке HILIC, а меченные изотопами стандарты легко доступный. Я не эксперт в ЯМР, но я знаю, что глютамин измеряется регулярно.
Еще одно предостережение при анализе глютамина заключается в том, что он самопроизвольно разлагается в воде с образованием пироглутамата с периодом полураспада около двух недель при комнатной температуре, как показано в этой статье . Но я уверен, что вы знаете об этом.
Алан Бойд
пользователь137