Оптимизация сигнальных пептидов

Мы изучаем модификацию сигнального пептида рецептора в общей линии иммортализованных клеток человека. Клеточная линия уже экспрессирует необычно большое количество белка, но большая его часть не экспрессируется на поверхности.

Когда мы сравнили последовательность сигнального пептида в клеточной линии (в данном конкретном случае первый 19AA), мы обнаружили 2 мутации по сравнению с последовательностью дикого типа (WT). Одна очевидная идея, которую мы сделаем, состоит в том, чтобы восстановить пептид до версии WT.

Но мне были любопытны варианты, которые увеличивают трафик к плазматической мембране по сравнению с WT. Когда я искал группы, которые действительно сделали это, обычно это были большие экраны против всех возможных мутаций в сигнальном пептиде.

Существуют ли целевые подходы к выбору небольшого количества сигнальных пептидов для увеличения поверхностной экспрессии?

Я играю с заменой некоторых вирусных пептидов, которые совершенно не связаны, чтобы посмотреть, сможем ли мы получить повышенную экспрессию с рецептором, который все еще (полу)функционален.

Есть ли доказательства того, что сигнальная последовательность является причиной отсутствия поверхностной экспрессии? Знаете ли вы, где на самом деле находится остальная часть белка (не на поверхности)?
Судя по окрашиванию, кажется, что он в основном рассеян по цитоплазме, а не в точечных точках, как я мог бы подумать из-за неправильной складчатости. Мы также знаем, что то, что выражено на поверхности, является функциональным.
Далее меня интересует общий случай, если есть один, трансмембранные белки типа I, если тип нужен. Я скажу, что интересует какая-то конкретная модификация, даже если это сигнальный пептид, не обнаруженный у хозяина (например, вирусный). Я пытаюсь уговорить ребят из техподдержки разрешить мне вопросы о конкретном белке.
У меня нет ответа на вопрос, но я заинтригован этой проблемой. Похоже ли, что мутации могут повлиять на функцию SP? Между тем вот статья об общих принципах проектирования, которую вы, возможно, не видели. Она старая, но написана Дж. фон Хейне.
@AlanBoyd Любой фон Хейне стоит прочитать независимо от приложения. Это был основной источник, который заставил меня задать вопрос.
Кроме того, мутация представляет собой сериновую мутацию, поэтому я думаю, что она, вероятно, что-то меняет.

Ответы (1)

Вы можете активировать транскрипцию интересующего вас гена рецептора. Больше рецепторов производится = больше рецепторов экспрессируется на поверхности клетки.

Оптимизация сигнальных пептидов
СпросиСетьПолитика конфиденциальности1y, 0v