Я выращиваю E. coli , трансформированную плазмидой pUC19 со вставкой фермента в мозг крысы между указанными сайтами срезов ( Eco O109i и Hin dIII). Я выделил и создал рекомбинантную молекулу с помощью специального синтеза генов, так что ген, кодирующий фермент, легко встраивается в плазмиду. Это после lac-промотора и lac-оператора, поэтому нужна ли мне лактоза в питательной среде для производства фермента?
Я бы предпочел использовать синтетический аналог IPTG для индукции генов за промотором lac, так как они не деградируют (или, по крайней мере, намного медленнее, чем лактоза) и, таким образом, дают гораздо более сильный сигнал индукции.
Вам нужно будет протестировать оптимальную концентрацию IPTG, но в качестве отправной точки я бы использовал конечную концентрацию 1 мМ. Если это не оптимально (много нерастворимого белка или недостаточно), вы можете изменить концентрацию в любом направлении. Для начала используйте ночную культуру для инокуляции свежей культуры утром и следите за OD 600 , пока она не достигнет 0,6-0,8, прежде чем добавлять IPTG.
МэттДмо
Март Хо