КПЦР: перекрестное загрязнение при запечатывании планшета

Я пытаюсь провести ПЦР в реальном времени на плазмиде, и у меня есть положительные и отрицательные контроли рядом друг с другом, а также контроль без матрицы. В последнюю очередь я добавляю 1 мкл моего шаблона в 96-луночные планшеты (точнее, на боковую стенку лунки), заклеиваю планшет оптическим клеем (прикладывая давление рукой) и затем центрифугирую.

Во время герметизации я заметил, что капля шаблона, которую я добавляю сбоку от лунок, впитывается и, вероятно, распространяется на соседние лунки. введите описание изображения здесьЯ замечаю усиление даже в лунках, где добавлял воду вместо шаблона

Кто-нибудь замечал то же самое или есть какие-либо предложения, как этого избежать? Вы добавляете шаблон в жидкость в лунке или на боковой стенке?

Ответы (1)

Я не могу сказать, что это случалось со мной раньше (но также не делайте qPCR все время).

В принципе, можно добавить шаблон сбоку от лунки, так как это также позволяет вам визуально подтвердить, что вы действительно добавили шаблон. Однако, если у вас возникли проблемы, рассмотрите возможность добавления шаблона в жидкость.

Как еще один способ избежать этой проблемы, я бы попробовал сначала слегка положить клейкую фольгу сверху, а затем прижать/зафиксировать чем-то прочным с прямым краем (для этого есть специальные пластиковые штучки, но можно использовать коробку для наконечников). тоже работа).

Спасибо за ответ. В лаборатории я нашел пластиковый аппликатор для запечатывания планшетов. Я попробую и посмотрю, как это улучшит результат.
Я попробовал герметизировать поверочную линейку, и она определенно не впитывает образцы и не загрязняет их перекрестно. Спасибо за совет!
КПЦР: перекрестное загрязнение при запечатывании планшета
СпросиСетьПолитика конфиденциальности1y, 0v