Методы выделения ДНК из волос?

TLDR: Может ли кто-нибудь указать метод(ы) экстракции и выделения геномной ДНК для волос, которые будут использоваться для ПЦР, желательно подробно, поскольку я новичок.

Я попытался поискать в Google методы выделения ДНК для волос (фолликулов и/или корней) и нашел различные источники, один из которых содержал наиболее подробную информацию об использовании или органических соединениях, к которым у нас нет доступа. Является ли их предпочтительным методом извлечения ДНК из волос, учитывая, что геномная ДНК будет в небольших количествах, я полагаю, что это может иметь какое-то отношение к процессу извлечения.

Не могли бы вы дать нам немного информации? Это облегчило бы ответ на вопрос.
@Chris Это была почти вся предыстория, я новичок, которому нужно извлечь ДНК из волос для исследования профессора. Я верю, что он послал меня на это задание как способ самообучения, но я думаю, что я не в курсе, учитывая мой вопрос здесь.
@MattDMo Я видел этот источник, но мне не хватает порошка для этого.
@RoSiv Когда вы пишете, что у вас нет доступа к определенным органическим соединениям, не указывая, что вы можете сделать, трудно давать рекомендации.
@Chris Это говорит о моей неумелости, я полагаю, у меня нет доступа к фенолу или хлороформу, и я не могу использовать метод органической экстракции. Я тоже не очень хочу, учитывая, что я никогда не работал с ним раньше. Я надеялся, что будет «простое» решение с множеством «обычных» лабораторных ингредиентов.
Извините, у вас нет доступа к стиральному порошку ? Мне очень трудно в это поверить.
@RoSiv Это важная информация, которая относится к вашему вопросу. Я привык работать с опасными химическими веществами (с надлежащим защитным снаряжением), так как это часть моего обучения. Ничего особенного в этом нет.
@Chris Если бы я занимался органической экстракцией фенолом / хлороформом, не могли бы вы дать какие-либо советы или предложения, даже источники / методы?

Ответы (1)

Я пытался выяснить что-то, что работает в течение некоторого времени. Недавно я попробовал 3 дешевых протокола с использованием общедоступных лабораторных реагентов. Я использовал буккальные образцы (0,2 мл слюны).

1) Кипячение образца в трис-ЭДТА-буфере 2) Экстракция NaOH 3) Прямой N-лизинг

Я сравнил их с набором для выделения геномной ДНК (FAST DNA Prep — MP Biomedicals).

Я слышал, что многие люди используют экстракцию NaOH для получения ДНК из препаратов тканей и клеток, но ни один из первых трех способов не сработал у меня после 2-3 попыток. Один из сотрудников моей лаборатории сказал, что я могу заменить бисер на вортексирование со стеклянными шариками.

Я пробовал вортексировать с бисером всеми четырьмя способами, включая набор, и только набор сработал. Я получил результат ПЦР с контрольных праймеров.

Если посмотреть на затраты на приобретение всех ингредиентов для буферных наборов, то они не такие уж и дорогие. 1 − 2 на образец.

Многие из этих наборов могут работать с твердыми тканями животных, хотя тот, что у меня есть, конкретно не относится к волосам. Я бы попробовал.

Я предполагаю, что смысл моего сообщения был в том, что существует множество простых звучащих опубликованных методов, но они не всегда дают результаты без кучи отладки. Я знаю, что щелочной лизис помог нескольким людям, которых я знаю, и он лежит в основе наборов. Это довольно просто.

Во всяком случае, это мой опыт.

Круто видеть тебя активным (ты один из двух с 20k+ и полными привилегиями после выпуска :-)! Тем не менее, мне было интересно, есть ли в ротовой полости волосы, учитывая вопрос ОП?
Отлично, интересно, +1!
Методы выделения ДНК из волос?
СпросиСетьПолитика конфиденциальности1y, 0v